Kromasil色譜柱是一種常用于液相色譜(HPLC)的高性能色譜柱,廣泛應(yīng)用于化學(xué)和生物分析。使用Kromasil色譜柱時(shí),可以遵循以下指南,以確保其最佳性能和延長(zhǎng)使用壽命:
1.選擇合適的色譜柱
根據(jù)樣品的性質(zhì)(極性、分子量等)和分析目的選擇合適的Kromasil色譜柱型號(hào)。常見的類型有C18、C8、Phenyl等。
2.準(zhǔn)備工作
清潔設(shè)備:確保色譜系統(tǒng)和管路沒有殘留物質(zhì),避免交叉污染。
溶劑準(zhǔn)備:使用高純度的溶劑,確保溶劑在使用前經(jīng)過過濾。
脫氣處理:對(duì)流動(dòng)相進(jìn)行脫氣處理,以消除氣泡,避免影響分離效果。
3.柱前準(zhǔn)備
平衡柱子:在首次使用或更換流動(dòng)相前,使用相應(yīng)的流動(dòng)相進(jìn)行柱子的平衡。通常需要運(yùn)行30分鐘到1小時(shí),直到基線穩(wěn)定。
溫度控制:如果需要,確保色譜柱在規(guī)定的溫度范圍內(nèi)工作。
4.樣品處理
樣品濃度:確保樣品濃度適當(dāng),避免過高導(dǎo)致柱子過載。
過濾樣品:使用0.45或0.2微米的濾膜過濾樣品,去除顆粒物,以保護(hù)柱子。
5.操作條件設(shè)置
流速設(shè)定:根據(jù)柱子的規(guī)格和樣品特性設(shè)定合適的流速。一般推薦的流速是柱子直徑和固定相顆粒大小的函數(shù)。
檢測(cè)波長(zhǎng):選擇合適的檢測(cè)波長(zhǎng)以提高檢測(cè)靈敏度。
6.數(shù)據(jù)采集與分析
在運(yùn)行過程中,實(shí)時(shí)監(jiān)控色譜圖,確保無異常峰出現(xiàn)。
對(duì)獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行整理和分析,確認(rèn)結(jié)果的重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
7.后處理與清洗
清洗柱子:在分析結(jié)束后,用適當(dāng)?shù)那逑慈軇_洗色譜柱,去除殘留物質(zhì)。對(duì)于強(qiáng)極性物質(zhì),可能需要用不同極性的溶劑進(jìn)行洗脫。
儲(chǔ)存:將柱子儲(chǔ)存在干燥、陰涼的環(huán)境中,避免陽(yáng)光直射和極端溫度。
8.維護(hù)與保養(yǎng)
定期檢查柱子的性能,監(jiān)測(cè)柱壓和柱效,及時(shí)進(jìn)行維護(hù)。
遇到柱效下降或基線噪聲增加時(shí),考慮進(jìn)行再生或更換柱子。
9.注意事項(xiàng)
避免使用pH值超過柱子耐受范圍的流動(dòng)相,通常KromasilC18柱子耐受的pH范圍為2-8。
避免高溫或高壓操作,以防損壞色譜柱。